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猪表皮生长因子在植物乳杆菌中的表达及其活性检测

DOI: 10.13345/j.cjb.140544, PP. 1325-1334

Keywords: 猪源乳酸杆菌,猪表皮生长因子,(pegf),断奶小鼠,绒毛高度,隐窝深度

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Abstract:

为获得一株高效表达猪表皮生长因子(pegf)的重组植物乳杆菌,并检测其生物活性,从仔猪肠道内容物中分离植物乳杆菌,选择其中生物活性最强的一株(lp-1)为宿主。以商品化乳杆菌表达载体piaβ8为骨架,干酪乳杆菌超强组成型启动子scp、m6前体蛋白信号肽sp、猪表皮生长因子pegf等为元件,构建表达pegf的植物乳杆菌重组表达载体pscpse。用电转化方法(2.0kv,2000ω,25μf,4.0ms)将重组载体pscpse转化入宿主菌lp-1中获得重组植物乳杆菌lp-pscpse。以tricine-sds-page法和pegfelisa特异性检测试剂盒检测目的蛋白的表达;用培养12h的阳性转化子菌体给刚断奶的balb/c小鼠灌胃,2次/天,连续10d,以断奶小鼠的体重、肠绒毛长度和隐窝深度的变化为指标,检测目的蛋白的生物活性。tricine-sds-page检测和小鼠实验结果显示,重组植物乳杆菌的培养上清中出现6kda左右pegf的特异性条带,且表达pegf的重组植物乳杆菌能显著增加(p<0.05)断奶小鼠的体重、肠绒毛高度和肠隐窝深度。以上结果表明,pegf能在植物乳杆菌中成功表达,且具有良好的生物学活性。

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