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禽网状内皮组织增殖病病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及其识别区分析

DOI: 10.13345/j.cjb.140225, PP. 75-85

Keywords: 禽网状内皮组织增殖病病毒,gp90蛋白,单克隆抗体,亲和力,抗原表位

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Abstract:

为了制备禽网状内皮组织增殖病病毒(rev)gp90蛋白的单克隆抗体,应用his-gp90融合蛋白免疫balb/c小鼠,取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合,经过筛选、3次亚克隆后获得3株稳定分泌抗rev-gp90蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为3g5-b8、3g5-a10和1g12。经间接elisa(enzyme-linkedimmunosorbentassay)方法检测,单克隆抗体的亲和力解离常数(kd)分别为6.483×10–10、4.844×10–10和9.330×10–10,3株单抗的亚型分别为igg1、igg1和igg2b。经westernblotting和间接免疫荧光实验检测,3株单抗均能识别rev感染df-1细胞后产生的gp90蛋白。以westernblotting方法利用单抗检测不同截短的gp90蛋白,初步确定3g5-b8和3g5-a102株单抗抗原识别区均位于gp90蛋白第200?245位氨基酸,而1g12株单抗识别区包含第230?235位氨基酸。这些单抗为rev的诊断和致病机理研究奠定了基础。

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