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酿酒酵母全基因组范围内筛选mtm1基因的抑制基因

Keywords: 酵母,筛选,mtm1,抑制基因

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mtm1基因对于维持锰超氧化物歧化酶的活性和线粒体正常功能十分重要,mtm1基因的缺失会严重影响酵母锰超氧化物歧化酶活性,并损伤线粒体功能,因此在非发酵培养基上不能生长.利用mtm1基因缺失的突变体在非发酵培养基上的生长缺陷,转入酵母基因组文库筛选mtm1抑制基因,发现mtm1基因缺失造成的损伤一旦形成不可逆转,重新引入mtm1基因也无法挽救,直接筛选无法得到抑制基因.为了避免mtm1缺失造成的不可逆损伤,在野生型酵母中先转入带有mtm1基因的质粒,再敲除染色体上的mtm1基因,随后转入基因组文库,再利用药物5-氟乳清酸(5-foa)迫使细胞丢失表达mtm1基因的外源质粒,再筛选能在非发酵培养基上生长的转化子,通过这种方法筛选发现,por2等5个基因的过表达可以挽救mtm1基因缺失造成的非发酵培养基上的生长缺陷,为深入了解mtm1基因的功能提供了线索,对筛选其他造成不可逆损伤的突变基因的抑制基因提供了一条可行的研究思路.

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