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ngal基因新型tpa反应元件结合蛋白的研究

Keywords: ngal基因,寡核苷酸dna亲和层析,maldi-tof-ms,tpa反应元件,tpa反应元件结合蛋白,tpa反应性

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以往研究发现,食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,ngal)基因的过表达具有明显的12-o-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate,tpa)诱导性,在启动子-152~-60区段存在着一种新型的tpa反应元件(tparesponseelement,tre),但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来.采用寡核苷酸dna亲和层析法(oligonucleotidetrapping)从食管癌细胞中分离纯化了ngal基因tre结合蛋白;经sds-page进一步分离,银染显示目标蛋白带.人工切取各目标蛋白带进行maldi-tof-ms分析,通过mascot软件搜索ncbi数据库,根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定8个核蛋白因子:c19、kiaa1949、tdrd1、rxrβ、fam54a、klf15、klf10和yy-1.最后,利用rt-pcr验证了这些核蛋白因子表达的tpa反应性,结果表明c19、kiaa1949、tdrd1、rxrβ和klf15等编码基因的转录表现出了明显的tpa反应性,提示可能是食管癌细胞中应答tpa刺激,参与ngal基因过表达的转录激活因子.

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