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菌物学报  2010 

Cloning, expression and characterization of a thermostable chitinase from Thermoascus aurantiacus var. aurantiacus
嗜热子囊菌原变种Thermoascus aurantiacus var. aurantiacus热稳定几丁质酶的克隆表达及活性研究

Keywords: chitin,thermophilic fungi,thermostable enzymes,gene encoding,Pichia pastoris
几丁质,嗜热真菌,嗜热酶,编码基因,毕赤酵母

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Abstract:

研究通过RT-PCR和Tail-PCR技术从嗜热子囊菌原变种Thermoascus aurantiacus var. aurantiacus中克隆了一个几丁质酶同源基因。该基因全长1,253bp,包含一个由1,197个碱基构成的开放阅读框,编码398个氨基酸。序列比对分析表明,该基因编码蛋白属于糖苷水解酶18家族的几丁质酶。利用基因重组的方法构建酵母分泌型表达载体,并转化毕赤酵母。在甲醇的诱导下,重组蛋白得到了高效表达,第6天的表达量最高,达到0.433g/L,酶活力为28.96U/mg,同时对表达的几丁质酶进行了纯化,SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为43.9kDa。该几丁质酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH值为8.0,70℃处理30min仍有45%的相对酶活,具有较好的热稳定性及工业应用价值。

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